甘草烏梅配伍化學變化的研究

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甘草烏梅配伍化學變化的研究 {轉貼}

http://www.shouxi.net夏雲,王靜蓉,申晉豔,嚴永清 2006-5-9 11:56:40 中華現代內科學雜誌 2006 年 5 月 第 3 卷 第 5 期


【摘要】 目的 研究常用藥對甘草烏梅配伍後各類主要成分的定性及定量變化。方法 TLC定性分析兩味藥中主要成分的變化，用容量法及HPLC測定兩味藥中主要成分的含量變化。結果 配伍後烏梅中有機酸、甘草中甘草酸含量均較單味藥中含量降低，同時甘草中黃酮類成分發生了異構化:異甘草苷在酸性水煎液中轉變為甘草苷。結論 不同比例(1︰1~1︰5)炙甘草與烏梅配伍上清液中有機酸的含量(以檸檬酸計)隨甘草比例的增加而減少。配伍組上清液中均不含甘草酸，甘草酸主要存在於沉澱中。





甘草、烏梅為中醫常用藥對。烏梅酸平，斂虛火而生津液。甘草甘平，益脾氣而生津液。兩藥配伍，酸甘化陰，有較強的生津止渴作用。另外烏梅酸澀，有收斂肺氣，固腸止潟之功，配甘草潤肺祛痰，補脾緩急，有共奏斂肺止咳，澀腸止潟之功。本文以TLC為手段，定性分析了烏梅甘草合煎液中有機酸、甘草酸、甘草黃酮類成分的變化。在此基礎上，用容量法測定了不同比例配伍組水煎液中有機酸的含量，並用HPLC法偵測了各配伍組上清液及沉澱中甘草酸的存在。


　　1 實驗材料


　　1.1 材料 烏梅、生甘草、炙甘草均購自南京市本草藥店。


　　1.2 藥品與試劑 鄰苯二甲酸氫鉀(pH 4.003),硼砂(pH 9.18)(南京醫葯股份有限公司);甲醇(色譜純):江蘇淮陰塑料製品廠精細化工研究所;高效液相用水為自製熏蒸水，煎煮程序用蒸餾水。


　　1.3 儀器 pH計:Hanna Instruments;高效液相色譜儀:Shimadzu10A;偵測器:Shimadzu SPD-10A;超音波清洗器:CQ250（上海必能超聲有限公司）;微量分析天平:TG323A，上海天平儀器廠。


　　1.4 對照品 檸檬酸(分析純):上海化學試劑採購供應站;甘草苷、異甘草苷為朱丹妮教授餽贈。


　　2 薄層層析分析配伍後各主要成分的化學變化


　　2.1 樣品液制備 樣品分組:烏梅、烏梅+生甘草、生甘草、烏梅+炙甘草、炙甘草；以上各組，以甘草1g為基準，烏梅與甘草配伍比例3︰2，稱取藥材2份，浸泡1h，15倍量水、10倍量水分別煎煮,保持微沸45min、30min，過濾，合併濾液，分別按下述方法制備樣品：(1)95%乙醇液:上述濾液，濃縮至小體積，真空乾燥，殘渣研成粉末，15ml 95%乙醇超聲提取10min，濃縮至1ml，供有機酸及黃酮類成分分析。(2)正丁醇萃取液:上述濾液，以水飽和正丁醇萃取4次(每次20ml)。合併萃取液，水洗滌3次(每次20ml)，減壓回收溶劑，殘渣以甲醇溶解並定容至1ml，供皂苷類成分分析。


　　2.2 對照品溶液制備 有機酸:稱取檸檬酸對照品10mg，以甲醇1ml溶解，即得；皂苷:稱甘草酸對照品，2mg,以甲醇1ml溶解，即得;黃酮類:稱取甘草苷、異甘草苷對照品各2mg,以甲醇1ml溶解，即得。


　　2.3 TLC分析 薄層板:自製硅膠G(60型)薄層板(供有機酸、皂苷分析);聚酰胺薄膜(供黃酮類分析);展開劑:醋酸丁酯—甲酸—水(4︰2︰2)上層液(有機酸)；乙酸乙酯—甲醇—水—冰醋酸(9︰1︰1︰0.5)(皂苷)；甲苯—氯仿—丙酮—甲酸(4︰2︰4︰1)(黃酮);顯色劑:溴甲酚綠乙醇液(有機酸)；25%三氯化銻氯仿溶液，電吹風加熱顯色，UV365nm下觀察(皂苷)；1.5%三氯化鋁乙醇溶液，UV365nm下觀察(黃酮)，結果見圖1~3。


　　 根據圖1~3，配伍後檸檬酸斑點較單味烏梅變小，且色彩變淺，敘述檸檬酸含量有所下降;甘草酸斑點熒光較單味甘草弱，含量略有下降，其餘皂苷類成分基本無變化;配伍後，甘草中黃酮類成分有明顯變化:生甘草配伍烏梅後，異甘草苷(Rf 0.167)的熒光斑點消失，同時，甘草苷(Rf 0.289)的斑點明顯變大，熒光增強。炙甘草與烏梅配伍後，除甘草苷的斑點熒光略有增強，其餘斑點熒光均減弱至幾不可見。1.檸檬酸。2.烏梅。3烏梅+生甘草。4.烏梅+炙甘草。5.生甘草圖1 有機酸的TLC分析 1.甘草酸。2.生甘草。3.生甘草+烏梅。4.炙甘草。5.炙甘草+烏梅。6.烏梅圖2 皂苷的TLC分析1.生甘草。2.生甘草+烏梅。3.炙甘草。4.炙甘草+烏梅。5.烏梅。6.甘草苷。7.異甘草苷圖3 黃酮的分析


　　3 烏梅與甘草配伍有機酸的含量測定


　3.1 樣品液的制備 配伍分組:(1)烏梅;(2)烏梅+炙甘草(5︰1);(3)烏梅+炙甘草(4︰1);(4)烏梅+炙甘草(3︰1);(5)烏梅+炙甘草(2︰1);(6)烏梅+炙甘草(1︰1);(7)炙甘草。以上各配伍組，以烏梅2.0g為基準，每組3份樣品，按比例稱取藥材，精密稱定。15倍量水回流煎煮1h，繼以10倍量水回流煎煮45min，過濾，合併濾液，得溶液a。將溶液a以蒸餾水定容至100ml，放冷後，有沉澱析出，離心(3000r/min，15min)，吸取上清液，作為供試液b。以少量蒸餾水洗滌沉澱，離心15min，棄去上清液。將沉澱真空乾燥，另作分析。
3.2 水煎液的pH值測定 pH計用鄰苯二甲酸氫鉀(pH 4.003)，硼砂(pH 9.18)緩衝溶液校訂，測定各樣品液a的pH值，測定結果見表1表1 各配伍組水煎液的pH值(24.6℃)根據表2，隨著甘草比例的增加，各配伍組水煎液的pH值逐漸增加。


　　3.3 有機酸含量測定


　　3.3.1 氫氧化鈉標準溶液的制備 稱取固體氫氧化鈉2.0g，精密稱定，置於250ml燒杯中，以蒸餾水100m1溶解，定量轉移至500ml容量瓶中，蒸餾水定容至刻度，得濃度為0.1003mol/ml的標準溶液。


　　3.3.2 酚酞指示劑的制備 稱取酚酞約1.0g，精密稱定，置小燒杯中，60ml 95%乙醇溶解，定量轉移至100ml容量瓶中，蒸餾水定容至刻度。

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　　3.3.3 樣品含量測定 精密吸取各配伍組供試液b 20ml於三角瓶中，加2~3滴酚酞指示劑，氫氧化鈉標準溶液滴定至終點。有機酸含量以檸檬酸計算，每毫升氫氧化鈉溶液相當於7.005mg檸檬酸(C6H8O7·H20)，測定結果見表2。表2 各配伍組中有機酸含量根據表2，隨著烏梅比例的減少，各配伍組上清液中有機酸的含量逐漸降低。


　　4 甘草酸的HPLC偵測


　　4.1 樣品液制備 （1）上清液樣品:溶液b用微孔濾膜抽濾，精密吸取2ml濾液置5ml容量瓶中，加入0.5m1無水乙醇，再以蒸餾水定容至刻度。（2）沉澱樣品:取各配伍組沉澱0.1g，10ml 50%乙醇超聲提取10min，過濾，濾液進行HPLC偵測。


　　4.2 色譜條件 色譜柱:Shimadzu ODS(4.6×150mm);流動相:甲醇-水-冰醋酸(69︰30︰3);流速:1ml/min;偵測波長：248nm；靈敏度:0.04。


　　4.3 樣品偵測 按上述色譜條件，進樣20μl，所得結果見圖4。根據圖4，配伍組上清液中，甘草酸峰消失，配伍組沉澱中，甘草酸峰出現。圖4 甘草酸的HPLC分析


　　5 討論


　　現代有關甘草、烏梅的化學成分研究較多1，2，但對兩藥合煎後的化學成分研究較少，有研究表明中藥的復方制劑在合煎中有些化學成分發生了變化，這些化學成分的變化可能對藥理作用有影響3，4。本研究結果提示：（1）pH值測定與溶液體積相關，為保持樣品間測定平行性，並真實反應水提程序中煎液pH值，採用回流煎煮方法，保持水體積恆定，進行pH值測定。（2）甘草酸在酸性水溶液中幾乎不溶。水提液熱濾冷卻後，絕大部分甘草酸以沉澱形式析出。同時配伍組中甘草比例增加，沉澱增多，則吸附有機酸也增多。TLC偵測驗證在甘草比例較多的配伍組沉澱中確實含有較多的檸檬酸，這可能是有機酸含量下降的主要原因。甘草酸為甘草中主要有效成分，它與烏梅配伍後，由于烏梅的酸性而在水溶液中以沉澱形式存在，這一現象對于該方的療效可能會有不利影響。（3）異甘草苷為查耳酮類化合物，該類成分在酸性條件下會轉變成相應的異構體——二氫黃酮類成分，因此在合煎程序中，由于烏梅的酸性，可能導致甘草苷發生了變化，轉變為相應的二氫黃酮，即甘草苷。在生甘草配伍組中，異甘草苷發生了異構化而斑點消失，甘草苷的斑點則由于異甘草苷的轉化而增大。在炙甘草配伍組中，大部分黃酮類成分在酸性條件下被破壞，而甘草苷的含量則由于異甘草苷的異構化而得以保持。（4）甘草中黃酮類成分與烏梅配伍後，由于烏梅的強酸性而有較明顯變化:異甘草苷轉變為甘草苷。這一變化與煎煮時間、配伍比例的關係還有待於進一步研究。


　　【參考文獻】


　　1 刑國秀，李楠，王童，等.甘草中黃酮類化學成分的研究進展.中國中藥雜誌，2003,28(7)：593.


　　2 沈紅梅，易楊華，喬傳卓，等.烏梅的化學成分研究.中草藥，1995,(2):12.


\n　　3 王靜蓉，馬宗瑜，嚴永清，等.芍藥甘草配伍化學變化研究.時珍國醫國藥，2000，11(2)：102.


　　4 夏雲，李志明，朱丹妮.生脈散復方化學動態變化與藥效關係的研究——生脈散復方化學的研究.中國中藥雜誌，1998,23（4）：230.


　作者單位： 1 201900 上海,寶山中心醫院藥劑科


　　2 210038 江蘇南京,中國藥科大學中藥復方研究室


　　(編輯：楊 熠)